- 王景文;杨勇;张志坚;陈波;苏春香;胡昌龙;蔡慧敏;李巧玉;
目的:探讨人胶质瘤U251细胞的干细胞特性及定向诱导分化为脂肪细胞的潜能。方法:采用免疫荧光染色检测U251细胞中干细胞标志物巢蛋白,人类婆罗双树样基因4(sal-like 4,SALL4),神经细胞黏附分子(neural cell adhesion molecule,NCAM),胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)的表达。采用成脂培养基诱导U251细胞,以CCK-8实验描记细胞生长曲线;油红-O染色及免疫印迹法检测脂肪细胞标志蛋白的表达。结果:胶质瘤细胞U251中巢蛋白,SALL4,NCAM,GFAP呈阳性表达;成脂诱导培养基定向诱导后,U-251细胞内大量橙红色脂滴形成;脂肪酸合酶、过氧化物酶体增殖物受体γ(PPARγ)、CCAAT增强子蛋白-β(CEBP-β)、脂联素表达增高。结论:人胶质瘤U251细胞具备干细胞表型,可定向诱导分化为脂肪细胞。
2016年01期 v.26;No.127 1-4页 [查看摘要][在线阅读][下载 577K] [下载次数:95 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:0 ] |[阅读次数:136 ] - 陈康;李坚;李玫瑜;
目的:研究敲减范可尼贫血(FA)通路上游FAAP20和下游RAD51C基因对人肺癌Calu-1细胞株顺铂敏感性的影响。方法:合成针对FAAP20和RAD51C基因的si RNA(FAAP20-si RNA和RAD51C-si RNA),用脂质体转染试剂将他们分别和同时转染于人肺癌Calu-1细胞株。蛋白质印迹法检测si RNAs转染后细胞FAAP20和RAD51C蛋白的表达以验证转染效率,并检测FANCD2蛋白单泛素化水平;CCK-8法测定转染前后的细胞增殖率;Annexin V/PI流式细胞术测定转染前后细胞凋亡率;免疫荧光法观察转染前后细胞核内FANCD2蛋白核聚小体的形成。结果:与转染前比较,转染FAAP20-si RNA和RAD51C-si RNA后经顺铂处理的Calu-1细胞FAAP20和RAD51C蛋白表达均明显降低,表明转染有效。敲减FAAP20基因后顺铂诱导的FANCD2蛋白单泛素化水平降低,核聚小体形成减少,而RAD51C基因敲减对FANCD2蛋白单泛素化和核聚小体形成并无明显影响。敲减FAAP20或RAD51C基因均可增强顺铂诱导的细胞增殖抑制和细胞凋亡作用,同时共敲减这两个基因则进一步增强顺铂对Calu-1细胞的杀瘤效应。结论:敲减FAAP20和RAD51C基因可增加Calu-1细胞对顺铂的敏感性,FAAP20和RAD51C基因的DNA损伤修复功能并不完全作用在同一条路径(范可尼贫血通路)。
2016年01期 v.26;No.127 5-10+16页 [查看摘要][在线阅读][下载 622K] [下载次数:105 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:4 ] |[阅读次数:100 ] - 薛雪;胡敏敏;秦娣;卢春;
目的:构建含IKK2EE的重组慢病毒载体,并检测其对核因子κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)信号通路的影响。方法:以真核表达质粒p MIGR1-IKK2EE为模板扩增出IKK2EE基因片段,并将其插入至慢病毒载体p CDHCMV-MCS-EF1-cop GFP中,构建重组质粒p CDH-IKK2EE。将此重组质粒和NF-κB虫荧光素酶报告质粒共同转染人胚肾上皮细胞(293 T细胞),24 h后检测IKK2EE对NF-κB活性的影响。将重组质粒p CDH-IKK2EE与包装质粒psPAX2和包膜质粒p MD2.G共同转染293 T细胞,包装表达IKK2EE的重组慢病毒,采用病毒梯度稀释法测定病毒滴度。将重组慢病毒感染人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs),通过免疫印迹法检测IKK2EE以及NF-κB信号通路中相关蛋白的表达,进一步采用免疫荧光法检测NF-κB p65亚基的核定位。结果:质粒双酶切鉴定以及核酸测序比对结果证实重组质粒p CDH-IKK2EE构建成功。虫荧光素酶报告实验结果显示,IKK2EE能够显著增强NF-κB报告质粒的活性。病毒梯度稀释法测得重组慢病毒滴度约为2×107pfu/m L。重组慢病毒感染HUVECs后,蛋白质印迹结果显示,细胞中磷酸化的NF-κB抑制子(inhibitor of NF-κB,IκB)激酶β(IKKβ)表达升高,IκBα表达下降以及磷酸化的p65表达上升。免疫荧光检测结果表明,重组慢病毒介导的IKK2EE能够显著促进HUVECs中NF-κB p65亚基入核。结论:成功构建了含IKK2EE的重组慢病毒载体,且其能够增强NF-κB信号通路活性。
2016年01期 v.26;No.127 11-16页 [查看摘要][在线阅读][下载 578K] [下载次数:90 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:0 ] |[阅读次数:213 ] - 曹莎莎;徐永芳;郑小翠;葛彦;居颂文;居颂光;
目的:制备鼠抗人PD-1单克隆抗体并对其生物学特性进行鉴定。方法:以稳定表达人PD-1分子的基因转染细胞株L929/PD-1免疫BALB/c小鼠,采用流式细胞术筛选分泌鼠抗人PD-1单抗的杂交瘤细胞株。用Ig G亚型快速定性试纸法、肿瘤细胞株表面PD-1分子识别谱检测、抗体效价测定、竞争结合抑制实验和蛋白质印迹等方法对所获PD-1单抗的生物学特性进行分析鉴定。结果:获得1株持续稳定分泌PD-1单抗的杂交瘤细胞株,命名为6E1。单抗6E1的重链为Ig G1、轻链为κ。单抗6E1对肿瘤细胞株U937、Thp-1、Jurkat细胞表面PD-1分子的识别谱与商品化PD-1单抗MIH4一致。单抗6E1与商品化抗体MIH4具有相似的识别位点。蛋白质印迹检测结果表明单抗6E1可特异性识别PD-1分子。结论:成功获得了1株鼠抗人PD-1单克隆抗体。
2016年01期 v.26;No.127 17-20页 [查看摘要][在线阅读][下载 406K] [下载次数:485 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:5 ] |[阅读次数:84 ] - 濮荔;郑金旭;
目的:探讨咖啡酸苯乙酯(caffeic acid phenethyl ester,CAPE)联合柴胡皂苷d(saikosaponin d,SSd)抗小鼠肺纤维化的作用及其机制。方法:将180只昆明小鼠随机分为5组,分别为对照组(n=20),博来霉素组、地塞米松组、CAPE组和CAPE+SSd组,后4组为造模组(气管内注射博来霉素,5 mg/kg),每组40只;造模后1 h,对照组与博来霉素组分别腹腔注射等量生理盐水,其余3组分别每天腹腔注射地塞米松0.1 m L(5 mg/kg),CAPE 0.1 m L(10 mg/kg),0.1 m L CAPE+0.18 m L SSd,连续28 d。给药第3、7、14、28天每组各处死5只小鼠,取肺组织行HE染色观察组织形态变化;观察小鼠自然生存状况;生化法检测肺组织及外周血中超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛含量;碱水裂解法检测肺组织中羟脯氨酸含量。结果:地塞米松组、CAPE组和CAPE+SSd组小鼠存活率均高于博来霉素组(P<0.05);CAPE+SSd组小鼠肺泡炎和肺纤维化程度较博来霉素组明显减轻。地塞米松组、CAPE组和CAPE+SSd组中肺组织羟脯氨酸、丙二醛含量和血清丙二醛含量均明显低于博来霉素组(P均<0.05),肺组织和血清SOD含量均明显高于博来霉素组(P<0.05);其中,与CAPE组相比,CAPE+SSd组肺组织羟脯氨酸、SOD含量明显增高,肺组织和血清丙二醛含量明显降低(P<0.05)。结论:CAPE与SSd联合应用有较明显的抗肺纤维化作用,其机制可能与抗脂质过氧化作用有关。
2016年01期 v.26;No.127 21-25页 [查看摘要][在线阅读][下载 775K] [下载次数:188 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:6 ] |[阅读次数:142 ] - 张璐玢;谢梦晓;陈云鹏;徐晓昱;张彩云;冯晖晖;刘霞;周小明;夏圣;邵启祥;
目的:以p MSCV-puro载体(MGP)为骨架,构建带有绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的小鼠micro RNA-31(mi R-31)反转录病毒载体MGP-31。方法:PCR扩增带有NotⅠ以及XhoⅠ酶切位点的mi R31的前体(premi R-31)序列,然后克隆至MGP载体上,测序鉴定。将构建的MGP-31质粒转染HEK-293T细胞,通过荧光显微镜观察GFP的表达情况,实时定量PCR检测mi R-31转录水平以评估MGP-31质粒的转染效率。结果:基因序列分析显示pre-mi R-31基因序列正确,并成功插入MGP载体,转染HEK-293T细胞可表达GFP,实时定量PCR结果表明转染MGP-31质粒的HEK-293T细胞可高表达mi R-31。结论:MGP-31反转录病毒载体构建成功。
2016年01期 v.26;No.127 26-30页 [查看摘要][在线阅读][下载 467K] [下载次数:146 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:0 ] |[阅读次数:101 ] - 倪颖;徐青青;凃晶晶;张嘉文;沈楚莹;王梦茹;邵世和;
目的:观察酸浆水煎液对胃癌BGC-823细胞增殖的影响并探讨其机制。方法:将对数生长期的BGC-823细胞随机分为对照组、1.562 5、3.125、6.25、12.5、25 g/L实验组,分别用空白培养基和对应浓度酸浆水煎液培养24,48,72 h,倒置显微镜观察各组细胞生长状况和形态;MTT法检测各组细胞增殖活性;分别用3.125,6.25,12.5 g/L酸浆水煎液培养BGC-823细胞24,48 h,采用流式细胞术分析各组细胞周期。结果:对照组细胞排列紧密、形态规则,随酸浆水煎液浓度增加和作用时间延长,实验组BGC-823细胞逐渐出现接触松散,变圆变小,数量减少等生长抑制现象,12.5,25 g/L实验组变化明显;与对照组相比,不同浓度酸浆水煎液组细胞存活率明显降低(P<0.05);3.125,6.25,12.5 g/L酸浆水煎液作用细胞24,48 h后,G_2期细胞比例较对照组明显升高(P<0.05),且呈时间和浓度依赖性。结论:酸浆水煎液抑制胃癌BGC-823细胞增殖,且呈时间和浓度依赖性,其机制可能与细胞周期阻滞于G_2/M期有关。
2016年01期 v.26;No.127 31-34页 [查看摘要][在线阅读][下载 522K] [下载次数:127 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:2 ] |[阅读次数:109 ] - 庄明峰;徐晓涵;刘大东;宋明明;王旭;秦魏婷;孙炳伟;
目的:探讨θ型蛋白激酶C(PKCθ)/Munc18a信号途径介导的脓毒症时血小板α颗粒释放及外源性一氧化碳释放分子Ⅱ(CO-releasing molecules-2,CORM-2)的干预机制。方法:采集健康成年人肘静脉血,差速离心法分离出血小板,随机分为正常对照组,脂多糖刺激组,无活性的CORM-2(i CORM-2,50μmol/L)组,CORM-2(10μmol/L)组,CORM-2(50μmol/L)组。为进一步探讨PKCθ的功能,设立脂多糖+AEB071组和脂多糖+CORM-2(50μmol/L)+AEB071组接受PKCθ抑制剂AEB071(50 nmol/L)干预。随后采用ELISA法检测各组血小板α颗粒释放的血小板源性生长因子BB(platelet-derived growth factor BB,PDGF-BB)和MMP-2,流式细胞术检测血小板P-选择素的表达;免疫荧光法检测血小板α颗粒的分布;同时用蛋白质印迹法检测血小板关键信号分子PKCθ和Munc18a的活性。结果:CORM-2(10、50μmol/L)干预能够有效抑制脂多糖刺激后血小板P-选择素、PDGF-BB和MMP-2的释放(均P<0.05)。免疫荧光检测结果显示CORM-2能抑制脂多糖刺激后血小板α颗粒的释放。脂多糖刺激后血小板PKCθ和Munc18a的磷酸化水平在AEB071组与CORM-2(50μmol/L)组均明显降低(均P<0.05)。结论:CORM-2的干预能够有效地抑制脓毒症时血小板α颗粒的异常释放,其机制可能涉及PKCθ/Munc18a信号途径。
2016年01期 v.26;No.127 35-39+44页 [查看摘要][在线阅读][下载 388K] [下载次数:144 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:2 ] |[阅读次数:195 ]
- 张敬坡;冯雷;秦静;郑韬;张传宝;
目的:比较腹腔镜胃旁路术(laparoscopic Roux-en-Y gastric bypass,LRYGB)和腹腔镜胃袖状切除术(laparoscopic sleeve gastrectomy,LSG)治疗肥胖合并2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)的疗效。方法:选择21例肥胖合并T2DM行手术治疗的患者,按术式分为LRYGB组(n=11)和LSG组(n=10),分析两组患者手术前和手术后1、6、12月内糖代谢指标变化;SF-36生命质量量表分析两组患者术后生理健康和精神健康;调查患者术后生活满意度。结果:与术前比较,两组患者手术后1,6,12月空腹血糖、餐后2 h血糖、糖化血红蛋白、胰岛素抵抗指数、空腹C肽、体质量指数水平均明显下降(P均<0.05),而同一时间点两组患者血糖指标间的差异无统计学意义(P>0.05);LRYGB组术后患者生理功能、总体健康、活力、情感职能和精神健康生较LSG组明显改善(P<0.05),术后12个月生活满意度(90.9%)明显高于LSG组(80.0%,P<0.05)。结论:LRYGB和LSG均是治疗肥胖合并T2DM的可靠方法,但前者患者生活质量优于后者。
2016年01期 v.26;No.127 49-53页 [查看摘要][在线阅读][下载 129K] [下载次数:133 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:6 ] |[阅读次数:67 ] - 郭书华;蒋小猛;何莉云;王晓燕;
目的:探讨内镜黏膜下层剥离术(endoscopic submucosal dissection,ESD)治疗上消化道黏膜高级别上皮内瘤变(high-grade intraepithelial neoplasia,HGIN)的临床疗效及分析手术前后标本病理特点。方法:选择48例上消化道黏膜HGIN患者,均采用ESD治疗。观察并记录手术时间、并发症、病灶大小、术后病理特点,评价整块切除率、完整切除率及治愈性切除率等指标。结果:ESD手术时间为(76.8±23.4)min;1例局部复发,1例穿孔,2例食管术后狭窄;切除标本最大直径(25.9±11.4)mm;术后病理证实维持HGIN 33例、HGIN伴局灶癌变11例、高中分化腺癌3例、低级别上皮内瘤变1例;手术整块切除率为100%,完整切除率为95.8%(46/48),治愈性切除率为95.8%(46/48)。结论:上消化道黏膜HGIN具有潜在癌变风险,ESD可安全、有效地一次性完全切除病灶,且可提供完整标本行进一步病理学评估。
2016年01期 v.26;No.127 54-56+60页 [查看摘要][在线阅读][下载 121K] [下载次数:140 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:0 ] |[阅读次数:96 ] - 高毅娜;胡越;王涛涛;韦青;孙湘;俞力;
目的:研究肝细胞核因子-4α(hepatocyte nuclear factor-4α,HNF-4α)基因的P2启动子区域的2个单核苷酸多态性(SNP)位点rs1884614和rs2144908与2型糖尿病的相关性。方法:收集2型糖尿病患者328例和非糖尿病患者196例,应用Taq Man SNP Genotyping系统进行rs1884614和rs2144908的基因型多态性分析。并分析它们与患者有关临床代谢指标的关系。结果:两组的基因型分布及等位基因频率差异无统计学意义(P>0.05);但在非肥胖(BMI<25 kg/m~2)患者的OGTT检测中,rs1884614 T/T基因型与较小的血浆胰岛素曲线下面积存在相关性(P<0.05)。结论:HNF-4α基因的P2启动子区的SNP rs1884614可能影响江苏地区非肥胖型2型糖尿病患者的胰岛素分泌。
2016年01期 v.26;No.127 57-60页 [查看摘要][在线阅读][下载 126K] [下载次数:63 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:2 ] |[阅读次数:103 ] - 邱崇荣;付强;眭建;张倩;魏鹏;朱可;陆奕;万鹏;
目的:探讨ST段抬高型心肌梗死(ST-segment elevation myocardial infarction,STEMI)患者血液中性粒细胞/淋巴细胞比值(neutrophil to lymphocyte ratio,NLR)、内皮细胞特异性分子-1(endothelial cell specific molecule-1,ESM-1)水平及与近期预后的关系。方法:序贯入选急性STEMI患者105例,同时纳入健康成年对照组33例,比较两组NLR、ESM-1水平差异,并记录STEMI患者住院期间及出院后3个月主要不良心血管事件(major adverse cardiovascular events,MACE)。Logistic回归分析MACE发生的危险因素。结果:STEMI组NLR、ESM-1水平明显高于对照组(P=0.00)。相关性分析表明,NLR与TIMI积分(r=0.19,P=0.04),肌钙蛋白(r=0.26,P=0.01)呈正相关。单因素Logistic回归显示,NLR(OR:1.095,95%CI:1.021~1.175,P=0.01)、ESM-1>1.01μg/L(OR:3.011,95%CI:1.049~8.642,P=0.04)、年龄(OR:1.044,95%CI:1.008~1.082,P=0.02)、HDL-C(OR:6.692,95%CI:1.695~26.426,P=0.01)、LDL-C(OR:1.701,95%CI:1.148~2.522,P=0.01)、TIMI评分(OR:1.408,95%CI:1.164~1.704,P=0.00)为MACE发生的危险因素。多因素Logistic回归显示NLR(OR:1.113,95%CI:1.026~1.207,P=0.01)、ESM-1>1.01μg/L(OR:3.543,95%CI:1.079~11.632,P=0.04)为MACE发生的危险因素。结论:STEMI患者NLR、ESM-1浓度>1.01μg/L可能对发生MACE具有预测价值。
2016年01期 v.26;No.127 61-64页 [查看摘要][在线阅读][下载 126K] [下载次数:158 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:18 ] |[阅读次数:106 ] - 秦岩;谭友文;徐岷;
目的:评价抗肿瘤坏死因子英夫利西单抗(infliximab,IFX)和免疫抑制剂环孢素对于激素难治性溃疡性结肠炎疗效及安全性的差异。方法:以infliximab,ciclosporin,ulcerative colitis,randomized controlled trials为检索词,检索Cochrane图书馆、Pubmed、Google、CBM等数据库及Cochrane图书馆临床对照试验数据库。以英夫利西单抗、环孢素、溃疡性结肠炎、随机对照试验为检索词检索万方数据库、中文期刊全文数据库及中国生物医学文献数据库,对纳入文献逐个进行质量评价和资料摄取。检索文献年限为2004年1月至2014年3月。采用Rev Man 5.2软件对数据进行统计分析。结果:共纳入7篇文献,环孢素组治疗3个月结肠切除率明显高于英夫利西单抗组(RR=2.19,95%CI:1.50~3.20,Z=4.04,P<0.000 1);环孢素组治疗12个月结肠切除率明显高于英夫利西单抗组(RR=1.58,95%CI:1.19~2.09,Z=3.21,P=0.001);两组用药并发症发生率比较,差异无统计学意义(RR=1.17,95%CI:0.70~1.95,Z=0.60,P=0.55)。结论:英夫利西单抗治疗激素难治性溃疡性结肠炎的效果优于环孢素,而两种药物使用安全性差异并不明显。
2016年01期 v.26;No.127 65-70页 [查看摘要][在线阅读][下载 472K] [下载次数:232 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:11 ] |[阅读次数:63 ] - 史丽;李明霞;王立坤;刘俊峰;宁改君;任卫东;
目的:分析复方丹参滴丸联用阿托伐他汀钙治疗2型糖尿病合并颈动脉硬化患者的临床疗效。方法:选取本院接受治疗2型糖尿病患者90例,随机分为观察组与对照组,两组患者均采用常规降糖治疗,对照组在此基础上服用阿托伐他汀钙,观察组联用复方丹参滴丸与阿托伐他汀钙,治疗3个月。比较两组治疗前后的血脂、内皮素和一氧化氮、血栓素B2、血管黏附因子-1(s ICAM-1)、细胞间黏附分子-1(VCAM-1)、血清基质金属蛋白酶(MMP)-3、6-酮-前列环素水平,双侧颈动脉粥样硬化斑块面积(CASPA)、内膜中层厚度(IMT)。结果:复方丹参滴丸联用阿托伐他汀钙可显著降低患者的血脂水平,能显著改变血清一氧化氮、内皮素、血栓素B2与6-酮-前列环素含量,降低血清s ICAM-1、VCAM-1、MMP-3水平及双侧CASPA与IMT,且疗效均明显优于单用阿托伐他汀钙(P<0.05)。结论:复方丹参滴丸联用阿托伐他汀钙能显著降低2型糖尿病患者血脂等血清学指标,改善内皮功能。
2016年01期 v.26;No.127 74-77页 [查看摘要][在线阅读][下载 124K] [下载次数:141 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:12 ] |[阅读次数:61 ]